技术领域：
本发明涉及生物工程领域，具体涉及一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方及制备方法。
背景技术：
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微生态制剂在水产养殖中的应用已超过20年的历史，其历程大致是光合细菌、芽孢杆菌、酵母菌、em菌、乳酸菌。近年来，随着水产养殖密度的不断提高以及全球化禁抗呼声愈来愈强烈，微生态制剂的调节水质和肠道作用愈来愈明显。乳酸菌作为一类新型菌群脱颖而出，其中又以粪肠球菌的功能最为有特色。在乳酸菌的使用过程中，遇到的最大问题是菌种的不耐保存和野外发酵不成功，粪肠球菌不耐保存和野外发酵扩培困难，为了解决上述技术问题，特提出一种新的技术方案。
技术实现要素：
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本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的不足之处，而提供一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方及制备方法。
本发明采用的技术方案为：一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方，其特征在于：该配方由枯草芽孢杆菌5-15亿cfu/g、乳酸粪肠球菌20-50亿cfu/g、一水葡萄糖100-200g/kg、统糠350-500g/kg及沸石粉250-350g/kg组成。
所述的乳酸粪肠球菌经过筛选器进行筛选，选取能在20℃的室温下保存生存不少于1个月的菌种。
所述的乳酸粪肠球菌的制备方法如下，选取南海水域养殖对虾肠道内筛选一株乳酸粪肠球菌，将一株乳酸粪肠球菌先进行冷冻处理，冷冻处理之后再进行干燥处理，使其做成菌粉状，并将菌粉利用磷脂做材料进行包被，将包被完成的菌粉在20℃的条件下保持两年，并在保存的过程中进行逐月的抽检，实时监测乳酸粪肠球菌的存活率。
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方的制备方法，该方法通过复配枯草芽孢杆菌、乳酸粪肠球菌及培养基，枯草芽孢杆菌为乳酸粪肠球菌提供相对厌氧的环境，培养基中的纤维素类和其他大分子成分，供乳酸粪肠球菌发酵利用。
所述的培养基的配方由酵母水解物100-200g/kg、一水葡萄糖200-300g/kg、黄腐酸钾100-150g/kg、统糠200-300g/kg及沸石粉100-200g/kg组成。
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方的验证方法，该方法采用正交试验对微生态制剂配方进行筛选验证，因子1为枯草芽孢杆菌浓度，因子2为乳酸粪肠球菌浓度，因子3为培养基浓度，监测发酵后液体中乳酸粪肠球菌的浓度，有机酸浓度，筛选出最适合的微生态制剂配方和培养基配方。
所述的培养基配方由酵母水解物100-200g/kg、一水葡萄糖200-300g/kg、黄腐酸钾100-150g/kg、统糠200-300g/kg及沸石粉100-200g/kg组成。
本发明的有益效果为：本技术一方面解决了粪肠球菌不耐保存和野外发酵扩培困难的问题。在解决粪肠球菌保存问题方面，本技术主要特点是筛选在常温下保存时间长的菌种和采用菌种钝化技术来解决；野外发酵问题则是通过制备成复合微生态制剂，以提高粪肠球菌的生存时间和创造优良的生存空间来解决。
具体实施方式：
结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例一：
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方，其特征在于：该配方由枯草芽孢杆菌5亿cfu/g、乳酸粪肠球菌20亿cfu/g、一水葡萄糖100/kg、统糠350/kg及沸石粉250/kg组成。
所述的乳酸粪肠球菌经过筛选器进行筛选，选取能在20℃的室温下保存生存不少于1个月的菌种。
所述的乳酸粪肠球菌的制备方法如下，选取南海水域养殖对虾肠道内筛选一株乳酸粪肠球菌，将一株乳酸粪肠球菌先进行冷冻处理，冷冻处理之后再进行干燥处理，使其做成菌粉状，并将菌粉利用磷脂做材料进行包被，将包被完成的菌粉在20℃的条件下保持两年，并在保存的过程中进行逐月的抽检，实时监测乳酸粪肠球菌的存活率。
实施例二：
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方，其特征在于：该配方由枯草芽孢杆菌10亿cfu/g、乳酸粪肠球菌35亿cfu/g、一水葡萄糖150g/kg、统糠400g/kg及沸石粉300/kg组成。
所述的乳酸粪肠球菌经过筛选器进行筛选，选取能在20℃的室温下保存生存不少于1个月的菌种。
所述的乳酸粪肠球菌的制备方法如下，选取南海水域养殖对虾肠道内筛选一株乳酸粪肠球菌，将一株乳酸粪肠球菌先进行冷冻处理，冷冻处理之后再进行干燥处理，使其做成菌粉状，并将菌粉利用磷脂做材料进行包被，将包被完成的菌粉在20℃的条件下保持两年，并在保存的过程中进行逐月的抽检，实时监测乳酸粪肠球菌的存活率。
实施例三：
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方，其特征在于：该配方由枯草芽孢杆菌15亿cfu/g、乳酸粪肠球菌50亿cfu/g、一水葡萄糖200g/kg、统糠500g/kg及沸石粉350g/kg组成。
所述的乳酸粪肠球菌经过筛选器进行筛选，选取能在20℃的室温下保存生存不少于1个月的菌种。
所述的乳酸粪肠球菌的制备方法如下，选取南海水域养殖对虾肠道内筛选一株乳酸粪肠球菌，将一株乳酸粪肠球菌先进行冷冻处理，冷冻处理之后再进行干燥处理，使其做成菌粉状，并将菌粉利用磷脂做材料进行包被，将包被完成的菌粉在20℃的条件下保持两年，并在保存的过程中进行逐月的抽检，实时监测乳酸粪肠球菌的存活率。
以上三个实施例均采用以下制备方法进行制备：
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方的制备方法，该方法通过复配枯草芽孢杆菌、乳酸粪肠球菌及培养基，枯草芽孢杆菌为乳酸粪肠球菌提供相对厌氧的环境，培养基中的纤维素类和其他大分子成分，供乳酸粪肠球菌发酵利用。
所述的培养基的配方由酵母水解物150g/kg、一水葡萄糖250g/kg、黄腐酸钾130g/kg、统糠250g/kg及沸石粉150g/kg组成。
以上三个实施例均采用以下方法进行验证：
一种可用于野外发酵的复合微生态制剂配方的验证方法，该方法采用正交试验对微生态制剂配方进行筛选验证，因子1为枯草芽孢杆菌浓度，因子2为乳酸粪肠球菌浓度，因子3为培养基浓度，监测发酵后液体中乳酸粪肠球菌的浓度，有机酸浓度，筛选出最适合的微生态制剂配方和培养基配方。
使用效果实验：
本研究通过100家企业连续试用1年，考察该复合微生态制剂配方各方面的效果。测试项目评分标准为：非常满意5分，满意4分，一般3分，不满意2分，非常不满意1分。其中普通组为普通微生态制剂配方；
本发明优势在于能在野外较恶劣的养殖环境下将乳酸粪肠球菌简易扩培出來，并保存较长时间，为养殖户提供方便、低廉的微生态制剂用于调节水质和水生经济动物肠道健康，与之前的野外扩培易长霉菌、不耐保存相比，具有革命性的优势。
对于本领域的技术人员来说，可根据以上技术方案以及构思，做出其他各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变和变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。