组合物的利记博彩app
【专利摘要】一种包含鼠李糖脂和膜破坏剂的抗微生物组合物。
【专利说明】组合物
[0001 ]本发明涉及改进的包含鼠李糖脂的杀菌组合物。
[0002] 尽管存在相关现有技术，但本领域仍然需要改进的杀菌鼠李糖脂组合物。
[0003] 因此，第一方面，本发明提供了包含鼠李糖脂和细胞膜破坏剂(disrupter)的杀菌 组合物。
[0004] 单鼠李糖脂含有单个鼠李糖糖环。IUPAC名称是3-[3-[(2R，3R，4R，5R，6S)-3,4,5-三羟基 -6-甲基四氢吡喃(methyloxan)-2-基]氧基癸酰基氧基]癸酸。
[0005] 二鼠李糖脂含有两个鼠李糖糖环。IUPAC名称是3-[3-[4,5_二羟基-6-甲基-3-(3， 4,5_三羟基-6-甲基四氢吡喃-2-基)氧基四氢吡喃-2-基]氧基癸酰基氧基]癸酸。
[0006] 对于鼠李糖脂，在整篇本专利说明书中，前缀"单"和"二"分别用于表示单鼠李糖 月旨(具有一个鼠李糖糖环)和二鼠李糖脂(具有两个鼠李糖糖环）。如果使用缩写，则R1为单 鼠李糖脂而R2为二鼠李糖脂。
[0007] 单鼠李糖脂可以是由铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)生产的L-鼠李糖-β-羟基癸酰 基-β-羟基癸酸(RhaC 1QC1Q，化学式C26H48〇9)
[0008] 典型的二鼠李糖脂是L-鼠李糖-L-鼠李糖-β-羟基癸酰基-β-羟基癸酸(Rha2C 1QC10， 化学式C32H58O13)。
[0009] 实际上，根据碳源和菌株，具有不同烷基链长度组合的各种其它次要组分与上述 更常见的鼠李糖脂组合存在。单鼠李糖脂和二鼠李糖脂的比例可通过制备方法来控制。一 些细菌只生产单鼠李糖脂，参见US5767090:实施例1，某些酶可将单鼠李糖脂转化为二鼠李 糖脂。
[0010] 以下鼠李糖脂为涵盖在本发明内的单鼠李糖脂和二鼠李糖脂的来源(C12:1，C14: 1，表不具有双键的脂肪醜基链）：
[0011] -由铜绿假单胞菌生产的鼠李糖脂(单鼠李糖脂）：
[0012] Rha_C8_Ci〇，Rha_Ci〇_C8，Rha _CiQ_CiQ，Rha_Ci〇_Ci2，Rha _Ci〇_Ci2:1，Rha_Ci2_Ci〇，Rha _ C12： l~Cl〇
[0013] -由绿针假单胞菌(P · chlororaphis)生产的鼠李糖脂（仅单鼠李糖脂）：他&-(：10-C8，Rha -Ci〇-Ci〇，Rha-Ci2_Ci〇，Rha -Ci2: i_Ci〇，Rha-Ci2_Ci2，Rha-Ci2: i_Ci2，Rha-Ci4_Ci〇，Rha-Cl4: i_Ci〇〇
[0014] -单鼠李糖脂也可通过从铜绿假单胞菌(Psuedomonas aeruginosa)引入rhlA和 rhlB基因而从恶臭假单胞菌(P· putida)生产[Cha等，Bioresour Techno 1 · 2008 · 99(7): 2192-9]。
[0015] -由铜绿假单胞菌生产的鼠李糖脂(二鼠李糖脂）
[0016] Rha_Rha_Cs_Ci〇，Rha _Rha_C8_Ci2:1，Rha_Rha_Ci〇 _C8，Rha_Rha_CiQ_CiQ，Rha_Rha _Ci〇_ Ci2:1，Rha_Rha_Ci〇_Ci2，Rha_Rha _Ci2_Ci〇，Rha_Rha_Ci2: i_Ci2，Rha_Rha_Ci〇_Ci4 :1
[0017] -由类鼻疽伯克氏菌(Burkholdera pseudomallei)生产的鼠李糖脂(仅二鼠李糖 脂)：
[0018] Rha-Rha-Cu-Cu
[0019] -由植物伯克氏菌（假单胞菌）（Burkholdera(Psuedomonas)plantarii)生产的鼠 李糖脂(仅二鼠李糖脂）：
[0020] Rha-Rha-Cw-Cw
[0021 ]-由铜绿假单胞菌生产的鼠李糖脂，其最初未被识别为单或二鼠李糖脂：
[0022] C8_C8，C8_ClO，Cl0-C8，C8_Cl2:1，Cl2:1 _C8，Cl0-Cl0，Cl2_ClO，Cl2: l_ClO，Cl2_Cl2，Cl2: l_Cl2， Cl4_Cl0，Cl4: l_ClO，Cl4_Cl4 〇
[0023] 优选地，所述鼠李糖脂包含至少20重量％的二鼠李糖脂，优选50重量％二鼠李糖 月旨，更优选60重量％，甚至更优选75重量％且最优选至少90重量％二鼠李糖脂。
[0024] 根据本发明的组合物可以用作杀菌原材料，使得用户例如消费者可将其稀释入其 它组合物中，或组合物可以是消费品，其应用旨在对底物提供杀菌效果或甚至作为消费品 组合物中的防腐剂。
[0025] 优选地，所述细胞膜破坏剂包括酸，更优选有机酸。
[0026] 此处使用的优选的有机酸包括羧酸及它们的混合物。
[0027]优选的羧酸包括脂族、环脂族或芳族单_、二_、三-或多元羧酸及它们的组合/混合 物。多元羧酸优选在分子中含有2至10个碳原子，更优选为3至6个碳原子。也可以使用羟基 羧酸。
[0028]所述有机酸可以是脂肪酸。
[0029]优选的羧酸包括辛酸、丙酸、壬二酸、己酸、羟基苯甲酸、水杨酸、苹果酸、马来酸、 富马酸、琥珀酸、戊二酸、己二酸、柠檬酸、酒石酸，以及它们的混合物。
[0030] 市售混合物包含30-35%的己二酸，45%-50%戊二酸和10-18%的琥珀酸。此种混 合物可从BASF作为SOKALAN DCS获得。另一种适合的混合物为从Radici作为RAD頂IX获得。
[0031] 优选地，细胞膜破坏剂以制剂的0.01 -10重量％的范围存在。更优选地，细胞膜破 坏剂以5-10重量％的范围存在。
[0032]优选地，所述组合物是家庭护理和个人产品。
[0033]优选的家庭护理产品包括洗衣洗涤剂/清洁组合物，洗衣调理组合物，和硬表面清 洁剂例如手洗和机洗餐具洗涤组合物，厨房和浴室清洁剂。硬表面包括厨房和浴室表面、刀 具、餐具等。
[0034]个人护理组合物包括洗发剂、毛发调理剂、除臭剂，皮肤清洁组合物和口腔护理产 品，如牙膏和漱口水。
[0035] 以下为本发明的非限制性实施方案，仅作为示例。
[0036] 实施例1
[0037] 以下数据说明了包含鼠李糖脂和细胞膜破坏剂、辛酸的组合物的抑菌效果。
[0038] 材料和方法 [0039]微生物和培养条件
[0040] 铜绿假单胞菌ATCC 15442和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)ATCC 9144,在-20°C下保存于加20%甘油的营养肉汤中。将在30°C下于营养琼脂斜面上培养24小 时生长的细菌用于获得细菌悬液，调节570nm处的光学密度以提供108cfu/mL。
[0041] 鼠李糖脂的特性
[0042] 从获自 Jeneil Biosurfactant Co· (Saukville，Wisconsin)的样品分离获得鼠李 糖脂，其含有10 % (重量/体积)的单鼠李糖脂(C26H4809，分子量:504，在中性pH下的临界胶 束浓度:20mg/L M)和10% (重量/体积)二鼠李糖脂(C32H58013，分子量:650，在中性pH下的 CMC:1.5X10-430mg/L)〇
[0043] 细胞膜破坏剂:辛酸
[0044] 辛酸(CAS RN 0124-07-2)购自Sigma Aldrich(目录号C2875)，纯度大于99%。
[0045] 所述单和二鼠李糖脂由购自Jeneil的样品使用下面的程序分离得到，使用获得的 单独的R1/R2分数来生产上述10%鼠李糖脂溶液。
[0046]将定量的JBR425采用12M HC1酸化至pH 3并置于冷冻机过夜。将上清液采用氯仿 和乙醇的2:1混合物萃取3次。然后通过旋转蒸发除去溶剂，并将分离的鼠李糖脂混合物重 新溶解于甲醇中。
[0047]分离和表征混合物的方法采用HPLC连接离子阱电喷雾电离质谱仪进行。电离模式 为负模式，扫描范围50-1200Da。用于分离的柱是Phenomenex luna C18 250X4.6mm 5ym 柱。流动相:水(流动相A)和乙腈(流动相B)被用于分离，梯度由60:40(A:B)变化至30:70(A: B)，持续时间30分钟。系统在返回起始条件之前，全部以0.5ml/min的流速持续5分钟。进样 体积为1〇μ1。
[0048]表 1 通过 HPLC/MS 分析 JBR425
[0051 ] BioFlux流通设备上的生物膜生长
[0052]为分析流动条件下的生物膜形成，采用B i 〇 F 1 u X 2 0 0系统（F 1 u X i ο η Bioscienceslnc.，South San Francisco，CA)，其允许对专用多孔板进行自动图像采集。为 使生物膜生长，微流通道(深度，75μπι;宽度，350μπι)采用TSB(50% )以10 · Odyn/cm2灌注。将 107CFU的来自铜绿假单胞菌ATCC 15442,金黄色葡萄球菌ATCC 9144的过夜培养物及两者 的混合培养物接种于通道。将板在30°C下培养48小时，以使细胞粘附。生物膜形成后，除去 浮游细胞，以279yL/h的流速向输入孔添加 roS IX(作为对照)和不同处理物，持续30min。采 用Evon显微镜（1 OX，17 %光照）记录结果。
[0053] 结果
[0054] 使用鼠李糖脂和辛酸，铜绿假单胞菌ATCC 15442、金黄色葡萄球菌ATCC 9144及混 合培养的生物膜破裂。
[0055] 在Bioflux流通条件下，测定鼠李糖脂和辛酸一起对由铜绿假单胞菌ATCC 15442 生物膜、金黄色葡萄球菌ATCC 9144及混合培养预形成的生物膜的影响。确定了由辛酸与鼠 李糖脂组合产生的破坏。所有菌株的生物膜生长超过48h。然而，在所有情况下，在微流体通 道周围的扩展方面具有相当的可变性。铜绿假单胞菌生物膜和混合培养物在流动条件下较 好地形成（图ΙΑ，E和1G)，然而，由金黄色葡萄球菌ATCC 9144形成的生物膜（图1C)不厚，但 相对于自由生长的浮游细菌，其足够良好而被认为是展示出基本不同的生理状态的多细胞 集群。
[0056] 48小时后，所有的板用1^3 1乂冲洗，并采用鼠李糖脂(0.04%￥八)和辛酸(0.01% V/V)的组合进行处理30分钟，此阶段之后，超过90%的生物膜被破坏。有趣地注意到，革兰 氏阳性和革兰氏阴性微生物对鼠李糖脂和辛酸之间的组合的响应不同，这表明相较于当组 分单独施用的结果(数据未示出），它们之间可能存在协同作用。
[0057]结果如图1所示，其显示了在BioFlux通道中生物膜的形成和破坏情况。图像为相 位对比图像，并展示了在30°C下培育48小时后完全形成的生物膜，且图像采用Evon显微镜 (10X，17 %光照)记录如下
[0058] (A)处理前的铜绿假单胞菌ATCC 15442生物膜。
[0059] (B)用鼠李糖脂(0.04%)和辛酸(0.01%)处理后的铜绿假单胞菌ATCC 15442(A)。
[0060] (C)处理前的金黄色葡萄球菌ATCC 9144。
[0061 ] (D)用鼠李糖脂（0.04%)和辛酸（0.01%)处理后的金黄色葡萄球菌ATCC 9144 (C)。
[0062] (E)处理前的混合培养物（铜绿假单胞菌ATCC 15442/金黄色葡萄球菌ATCC 9144)〇
[0063] (F)用鼠李糖脂(0.0 4 % )和辛酸(0.01 % )处理后的混合培养物(E)。
[0064] (G)处理前的铜绿假单胞菌ATCC 15442。
[0065] (Η)用PBS IX处理后的铜绿假单胞菌ATCC 15442(G)。
【主权项】
1. 抗微生物组合物，其包含鼠李糖脂和膜破坏剂。2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述膜破坏剂包含羧酸。3. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述膜破坏剂包含有机羧酸。4. 根据前述任一项权利要求所述的组合物，其包含进一步的表面活性剂，所述表面活 性剂包含合成表面活性剂。5. 根据前述任一项权利要求所述的组合物，其中所述鼠李糖脂以总表面活性剂的1重 量％-95重量％，优选10-70重量％存在。6. 根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其是家庭护理或个人护理组合物。7. 根据权利要求6所述的组合物，其是个人护理组合物，优选选自洗发剂、调理剂、除臭 剂、皮肤清洁组合物、止汗剂。8. 根据权利要求6所述的组合物，其是家庭护理组合物，优选选自洗衣组合物和硬表面 清洗剂。9. 根据权利要求1-15任一项所述的组合物用于防止或破坏微生物生长的抗微生物的 用途。
【文档编号】C11D3/48GK105992814SQ201480069581
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2014年12月16日
【发明人】M·A·迪亚兹德里恩佐, A·S·贾梅森, P·S·史蒂文森
【申请人】荷兰联合利华有限公司